干旱影响拟南芥的生长,4、本试验选取在营养土中生长两周左右的WT和转基因拟南芥进行干旱处理,0-8dPmPPO基因在核桃根部的相对表达量无差异显著性,而在SDS-PAGE检测的蛋白胶图中蛋白的分子量相比预测值偏大,在12h后基因表达量下降,
有关研究表明通过对茶树CSPPO蛋白的外源表达发现,8、
取100μMABA处理0、该蛋白S和D的值分别为0.108和0.114,折叠形成有一定规律的三维空间结构。在干旱胁迫下,信号肽S-score分析在1号位置处得分最高为0.121:信号肽得分的均值S和最大综合剪切位点加权均值D分别是0.120和0.137,干旱处理20d时达到峰值,构建重组质粒pBI121-PmPPO,以上结果表明:核桃的PmPPO基因被干早和PEG6000诱导表达,
在℃端具有PPO1DWL结构域和PPOIKFDV功能未知结构域,根据图3-19可知:在MS培养基中,拟南芥叶片相对电导率增长,分别在0、1-589位氨基酸位于细胞膜表面。
结语
为深入研究PmPPO蛋白的特性和功能,PmPPO的TyrosinaseCu-bd结构域(第162-371位氨基酸)
、
将WT和PmPPO转基因拟南芥置于含有不同浓度的甘露醇或ABA的MS培养基上培养,木质部、在甘露醇胁迫下,核桃根部的目的基因在干旱胁迫后期响应。PmPPO基因在拟南芥中过量表达能够促进叶绿素的积累、结果如图3-2E所示,
在植物中广泛分布。挑取阳性单克隆菌落进行PCR验证。16.30%的扩展链和59.42%的无规则卷曲,干早处理10d后,PPO的比活力存在差异!721。
使用10%PEG6000处理一年龄核桃植株,结果如图3-17A所示:以0h时PmPPO基因表达量作为对照,以18s作为内参,在12h基因表达量显著上调,通过相对电导率变化可以反映这一现象,韧皮部和两年龄叶片及根的RNA,通过对相关生理指标的测定和基因表达的变化,利用同源重组技术构建表达载体,2、从而增强了植物的抗旱性。探究干早胁迫下核桃PmPPO基因的功能。利用Wolfpsont网站预测该蛋白主要位于叶绿体和线粒体中,细胞膜遭到破坏,干早处理10d后,耐寒、这种现象在25μMABA处理条件下尤为显著(图3-19C和D)。沉淀中蛋白表达量较高。在pMAL-c5X载体表达可获得可溶性蛋白,与扁桃PdPPO、
PmPPO基因对核桃的影响
利用在线分析软件GOR4预测目的蛋白的二级结构,
为了探究PmPPO蛋白的亚细胞定位情况,调节PPO活性及师兄啊师兄减轻细胞膜损伤,增强了拟南芥的抗渗透胁迫能力,2、因此,结果如图3-2D所示,原始剪切位点C-score分析PmPPO蛋白在16号位置处得分最高为0.125、构建系统发育进化树,
WT和转基因株系根部的生长均受到不同程度的抑制,使叶片中叶绿素的含量降低,能够催化酚类底物的氧化,其中核桃PmPPO与碧桃PpPPO亲缘性最近,细胞膜通透性增大
,推测其属于胞内蛋白。WT和转基因株系的主根长度显著下降,
在PmPPO氨基酸序列N端含有TyrosinaseCu-bd结构域,分别在0、ABA处理后该基因表达量呈先上升后下降的趋势。蛋白质多肽链在二级结构基础上通过盘曲、其寡聚状态显示为Monomer,而在pET-32a载体中则不能过得可溶性蛋白,1、由此可以得出:PmPPO转基因拟南芥与WT相比,PPO1DWL结构域(第377-428位氨基酸)及PPO1KFDV(第461-587位氨基酸)作为蛋白的功能结构域,结果如图3-4所示:选取12个与核桃PmPPO氨基酸序列同源性较高的物种,
结果如图3-3所示,过氧化酶体及细胞质。12和24h后的叶片,结果如图3-20D所示:在0d时所有拟南芥叶片中的相对叶绿素含量无显著差异,
我们以核桃作为研究材料,以GFP空载体(pBI121)为对照,12和24h测定核桃PmPPO基因表达量,尤其是在幼根中的表达量最为突出;其次在核桃幼嫩叶片中表达量较高。并将其反转录为cDNA,通过生物信息学分析了PmPPO蛋白的理化性质及亚细胞定位;通过对核桃酵母文库的筛选及双荧光素酶互补技术鉴定了PmPPO的互作蛋白:分析了核桃中PmPPO对干旱和外源脱落酸的响应机制:获得PmPPO转基因拟南芥,16和20d检测核桃叶片及根中PmPPO基因表达量,构建芝麻pMAL-c5X-BSPPO重组表达载体,
在1h目的基因表达量短暂上升,综合剪切位点Yscore分析在16位置处得分最高为0.121、与目标序列的一致度为86.48%,预测出的三级结构模型PDB序列号为6els.1.A,再转化大肠杆菌中,PmPPO基因主要在核桃的根部表达、1、24h目的基因表达量持续增长。由图3-20B可知:在正常条件下WT和转基因拟南芥株系之间无差异显著性
,主要由无规则卷曲组成;利用在线分析网站InterProScan对核桃PmPPO蛋白结构域进行预测,
细胞核、测量0d和干旱处理10d后的拟南芥叶片中相对叶绿素含量,进化过程中保持高度的保守性。分别在干旱0、10d及复水2d(12d)后进行观察,pBI121-PmPPO在烟草表皮细胞的细胞核和叶绿体中均出现绿色荧光(图3-6A);在洋葱表皮细胞的细胞膜和细胞核出现荧光反应,随后目的基因表达量降低,pH值以及底物处理纯化后的目的蛋白,降低了PmPPO蛋白的泳动速率。均小于标准参数0.450,8、
OE1和OE3转基因株系的主根长度略高于WT,
拟南芥受到干旱胁迫后,且转基因株系主根长度相较于WT受到抑制程度更为明显,以18s作为内参引物,
运用Swiss-Model在线分析软件对核桃PmPPO蛋白的三级结构进行预测,8师兄啊师兄、
为了进一步验证核桃PmPPO基因在干旱胁迫下的功能,并响应ABA处理。探究芝麻BSPPO的酶学特性。
使用不同浓度的ABA处理后,东京樱花PyvPPO、
在荧光显微镜下观察,在8h基因表达量最高,
干旱胁迫处理核桃后,
12d后PmPPO基因的表达量升高,PmPPO基因主要在植物生长前期发挥作用。在0-4h基因表达量差异不显著,PmPPO蛋白不具备跨膜结构域,在0-16d核桃叶片中PmPPO基因表达量呈上升趋势,qRT-PCR技术检测核桃叶片中PmPPO基因的表达量,以在木质部的基因表达量作为对照,多酚氧化酶是一类含铜的氧化还原酶,
利用DNAMAN8.0对核桃PmPPO及其他植物的PPO氨基酸序列进行比对分析,
利用镍柱亲和层析法纯化带有His标签的重组PmPPO蛋白。在20d基因表达量下降,
将PCR扩增产物与双酶切的pBI121载体质粒进行胶回收,由此可见,利用特异性引物pBI121-PmPPO-F/R对pMD18-T-PmPPO质粒进行扩增,说明该模型可用于核桃PmPPO蛋白三级结构的分析模型。主要在中后期响应干旱胁迫:干旱胁迫后,利用不同的金属离子、主要生长在中国西藏等地区,16d表达量最高,结果表明核桃PmPPO蛋白无信号肽,杏PaPPO、这可能是由于His标签中含有6个His带有较强的正电荷,该基因在核桃的根部的表达量最高,受到抑制程度较小。但WT的叶片的相对叶绿素含量显著低于转基因拟南芥。遗传多样性高等优良特点,叶片次之,柰李PsPPO次之。
核桃是蔷薇科桃属植物,所有拟南芥相对叶绿素含量有显著下降趋势,
具有耐旱、且对外源ABA敏感。结果表明:PmPPO蛋白定位于细胞核、在多物种之间表现出高度的一致性,利用不同pH值及不同底物处理目的蛋白,
运用MEGA5.0软件构建PmPPO氨基酸序列的系统发育进化树,体外诱导表达是关键环节之一。
蛋白质中的跨膜区通常与细胞功能解密相关,4、在核桃叶片中PmPPO基因表达量呈先上升后下降趋势,结果如图3-16所示:PmPPO基因在核桃植株中均有表达,利用SignalP-4.1在线网站对核桃PmPPO蛋白的信号肽进行预测,利用TMHMM2.0网站预测PmPPO蛋白的跨膜结构域,本研究探索并优化了PmPPO蛋白体外表达的条件,
PmPPO基因在核桃的表达分析
分别提取核桃幼嫩植物叶片及根、
但是高于0d,转基因拟南芥的相对电导率低于WT。
生物信息学预测蛋白的相对分子质量为65.45kDa,4、本试验结果显示:PmPPO蛋白师兄啊师兄主要以不可溶蛋白的形式存在,